产品货号：
BTN71205
中文名称：
土壤DNA提取试剂盒
英文名称：
Soil DNA column extraction kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品是专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂盒。
保存：室温，有效期1年。
氯仿
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- 去污染效果好，得到的DNA可以直接作为PCR模板或酶切，不需要再进行去腐殖酸处理。
- 操作过程简单快速，整个操作只需要10多分钟，扩容性好。
- 产量高，每克土壤一般可以提取到5～50μg DNA，片段长度在20～50kb，OD260/280一般都在1.8以上。
- 适合于各种土壤（包括河海沉积物）。
| 组分 | 规格 |
| 土壤DNA纯化溶液A | 25mL |
| 土壤DNA纯化溶液B | 25mL |
| 专用上柱液 | 40mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| DNA洗脱液 | 10mL |
保存：室温，有效期1年。
氯仿
- 65℃预热土壤DNA纯化溶液A，待其沉淀溶化后充分颠倒混匀。取0.5mL加入到1.5mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
- 称取0.1～0.3g的土壤，加入到装有预热的土壤DNA纯化溶液A的离心管中。
- 震荡器上剧烈震荡5～10分钟。如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较大离心管。也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5mL离心管中。
- 不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
- 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
- 14000g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积一般为300～400μL)。
- 在上清液中加入等体积的土壤DNA纯化溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
- 将离心管冰浴至少5分钟。
- 14000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL离心管，上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡，体积约0.7mL。
- 下面第8-第9步的氯仿抽提操作可以省略，直接进入第10步，但DNA的产量会低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果省略第8～9步直接进入第10步，则转移的溶液体积不要超过0.6mL，否则没有空间加专用上柱液。
- 加入0.2mL的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。
- 一定要让管底的溶液震荡起来。
- 14000g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。
- 离心后两相交界面有白色膜状物，有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。
- 将上清转移到新的1.5mL离心管时，不要超过0.6mL，否则没有空间加专用上柱液。如果有多余的可以弃之不用。
- 离心后两相交界面有白色膜状物，有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。
- 加入1.5倍体积的专用上柱液，上下颠倒30秒混匀。
- 分两次上柱（即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，14000g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，14000g室温离心半分钟，弃穿透液）。
- 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，14000g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，14000g室温离心半分钟，弃穿透液。
- 增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高。
- 14000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
- 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中，加入50μL DNA洗脱液。
- 室温放置离心吸附柱1～2分钟。
- 14000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为提取到的DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。
- 如何判断提取的ＤＮＡ没有腐植酸污染？
一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。二是检测最大光吸收。- 有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR扩增。
- 腐殖酸的最大吸收波长是多少？
腐植酸（humic acid）是一大类呈棕黑色或黑色的物质，其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同，有的土壤的腐殖酸在260nm有最大吸收，有的则在340nm。所以用特定的波长测定OD值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigma,Fluke等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。 - 是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品（已知的不含污染的DNA）能够发生，说明可能抑制作用。 - 如果得到的DNA样品还是含有抑制后续反应的腐植酸，如何去除？
如果提取的DNA原液不能扩增，可以将样品稀释10倍和100倍再进行PCR，抑制作用一般可以解除。如果仍然抑制，可以使用本公司的PCR抑制物清除剂。如果仍然不能解除，则可以通过腐殖酸清除剂（过柱法）去除。
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